安益譜 TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用：以人血清中激素含量測(cè)定為例
在臨床診斷和研究中，精準(zhǔn)檢測(cè)人體內(nèi)激素水平對(duì)于疾病的診斷、治療和監(jiān)測(cè)至關(guān)重要。近年來(lái)，隨著分析技術(shù)的不斷進(jìn)步，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）系統(tǒng)因其高靈敏度、高特異性和高通量的特點(diǎn)，逐漸成為生物樣本中激素檢測(cè)的首選方法之一。本文將詳細(xì)介紹安益譜 TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)在測(cè)定人血清中睪酮、雄烯二酮等激素含量中的應(yīng)用，探討其在臨床檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)和潛力。
一、引言：激素檢測(cè)的臨床意義
多囊卵巢綜合征（Polycystic Ovary Syndrome, PCOS）是一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝性疾病，主要表現(xiàn)為月經(jīng)不調(diào)、不孕、高雄激素血癥和卵巢多囊。高雄激素血癥是PCOS病理生理的核心問(wèn)題之一，通常通過(guò)臨床表現(xiàn)或生化檢測(cè)來(lái)評(píng)估。血清中總睪酮（Total Testosterone, TT）、游離睪酮（Free Testosterone, FT）、脫氫表雄酮（Dehydroepiandrosterone, DHEA）、硫酸脫氫表雄酮（Dehydroepiandrosterone Sulfate, DHEA-S）和4-雄烯二酮（4-Androstenedione, A4）等雄激素水平的檢測(cè)對(duì)于診斷和評(píng)估PCOS患者的代謝風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。
2023年發(fā)布的《多囊卵巢綜合征雄性激素質(zhì)譜檢測(cè)專家共識(shí)》建議使用LC-MS/MS同時(shí)測(cè)定患者體內(nèi)血清總睪酮和雄烯二酮含量，并通過(guò)計(jì)算游離睪酮指數(shù)（Free Androgen Index, FAI）來(lái)提高對(duì)高雄激素血癥的篩查效率。本研究利用安益譜 TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，對(duì)人血清中的睪酮、雄烯二酮、孕酮和17α-羥孕酮等激素進(jìn)行了檢測(cè)，旨在為臨床診斷提供一種高效、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。
二、實(shí)驗(yàn)部分
（一）樣品處理
樣品處理是確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵步驟。本實(shí)驗(yàn)中，取200μL待測(cè)血清樣本于1.5mL EP管中，加入20μL內(nèi)標(biāo)溶液和980μL甲基叔丁基醚。經(jīng)過(guò)渦旋混勻（2500rpm，10min）和離心（4℃，14000rpm，10min）后，取上清液800μL于96孔板中，45℃氮吹至干。在吹干的96孔板中加入160μL復(fù)溶液（50%甲醇），置于微孔板震蕩儀上2000rpm/min震搖2min，4000rpm離心5min，最后取5μL進(jìn)樣。
（二）色譜條件
色譜分離是LC-MS/MS系統(tǒng)的重要組成部分。本實(shí)驗(yàn)采用Waters BEH C18色譜柱（2.1mm × 50mm，1.7μm），流動(dòng)相A為含0.2mM氟化銨的水，流動(dòng)相B為含0.2mM氟化銨的甲醇，柱溫設(shè)定為40℃。梯度洗脫條件如下表所示：
| 時(shí)間(min) | 流速(mL/min) | A相(%) | B相(%) |
|---|---|---|---|
| 0 | 0.4 | 85 | 15 |
| 1.0 | 0.4 | 40 | 60 |
| 3.0 | 0.4 | 5 | 95 |
| 4.0 | 0.4 | 5 | 95 |
| 4.1 | 0.4 | 85 | 15 |
| 5.5 | 0.4 | 85 | 15 |
（三）質(zhì)譜條件
質(zhì)譜檢測(cè)是LC-MS/MS系統(tǒng)的核心環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)采用電噴霧離子化源正離子模式（ESI+）和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）進(jìn)行質(zhì)譜掃描。離子化源溫度為500℃，噴霧電壓為5000V，氣簾氣為20psi，霧化氣為50psi，輔助加熱氣為50psi，碰撞氣為8，EP為7.5V，CXP為0V。各化合物的離子對(duì)參數(shù)如下表所示：
| 待測(cè)物名稱 | Q1離子(m/z) | Q3離子(m/z) | 駐留時(shí)間(ms) | CE(V) | DP(V) |
|---|---|---|---|---|---|
| 雄烯二酮* | 287.2 | 97.0 | 25 | 12 | 100 |
| 雄烯二酮 | 287.2 | 109.0 | 25 | 15 | 100 |
| 睪酮* | 289.2 | 97.0 | 25 | 12 | 100 |
| 睪酮 | 289.2 | 109.0 | 25 | 15 | 100 |
| 17α-羥孕酮* | 331.2 | 97.0 | 25 | 12 | 100 |
| 17α-羥孕酮 | 331.2 | 109.0 | 25 | 15 | 100 |
| 黃體酮* | 315.2 | 97.0 | 25 | 12 | 100 |
| 黃體酮 | 315.2 | 109.0 | 25 | 15 | 100 |
| 雄烯二酮-d7* | 361 | 100.0 | 25 | 12 | 100 |
| 雄烯二酮-d7 | 294.2 | 331.2 | 25 | 15 | 100 |
| 睪酮-d3* | 294.2 | 97.0 | 25 | 16 | 100 |
| 睪酮-d3 | 292.2 | 113.0 | 25 | 12 | 100 |
| 17α-羥孕酮-d8* | 292.2 | 100.0 | 25 | 12 | 100 |
| 17α-羥孕酮-d8 | 339.2 | 109.0 | 25 | 16 | 100 |
| 黃體酮-d9* | 339.2 | 100.0 | 25 | 12 | 100 |
| 黃體酮-d9 | 324.1 | 109.0 | 25 | 16 | 100 |
*為定量離子對(duì)
三、結(jié)果與討論
（一）提取離子圖
4種激素的提取離子圖如圖1所示，從上到下依次為雄烯二酮、睪酮、17α-羥孕酮和黃體酮。這些圖譜清晰地展示了各激素的特征離子對(duì)，為后續(xù)的定量分析提供了可靠的基礎(chǔ)。
（二）線性范圍、回歸方程、精密度和準(zhǔn)確度
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各激素的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、精密度和準(zhǔn)確度均符合臨床檢測(cè)要求。具體結(jié)果如下表所示：
| 化合物 | 保留時(shí)間(min) | 線性范圍(ng/mL) | 回歸方程 | 相關(guān)系數(shù)(r2) | RSD%(低濃度/中濃度/高濃度) | 回收率%(低濃度/中濃度/高濃度) |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 雄烯二酮 | 2.891 | 0.1~100 | Y=0.401371X+0.013350 | 0.9986 | 5.1/5.1/5.9 | 97.4/100.0/93.5 |
| 睪酮 | 2.988 | 0.1~100 | Y=0.232695X+0.028263 | 0.9984 | 4.2/5.5/6.4 | 102.6/101.1/96.0 |
| 17α-羥孕酮 | 3.010 | 0.2~100 | Y=0.196638X+0.018117 | 0.9980 | 6.1/6.0/4.2 | 105.4/102.1/93.9 |
| 黃體酮 | 3.350 | 0.2~100 | Y=0.233521X+0.019886 | 0.9988 | 6.2/5.6/6.4 | 101.8/97.7/92.2 |
從表中可以看出，各激素的回歸方程相關(guān)系數(shù)均大于0.998，表明線性關(guān)系良好。低濃度、中濃度和高濃度的精密度（RSD%）均小于10%，回收率在92.2%~105.4%之間，說(shuō)明該方法具有良好的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。
四、總結(jié)
本研究利用ANYEEP TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，成功建立了人血清中睪酮、雄烯二酮、孕酮和17α-羥孕酮的檢測(cè)方法。該方法具有線性范圍寬、靈敏度高、準(zhǔn)確度好、前處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，單個(gè)樣本分析時(shí)間為5.5分鐘，適合高通量臨床檢測(cè)需求。ANYEEP TQ9100系統(tǒng)的應(yīng)用為臨床診斷和研究提供了一種高效、可靠的檢測(cè)工具，有助于提高對(duì)多囊卵巢綜合征等內(nèi)分泌代謝性疾病的診斷效率和治療效果。
